Image

B. Penentuan enzim glukosa

Home / - Bahagian lanjut / B. Penentuan enzim glukosa

Kebanyakan biomolekul tidak menyerap cahaya di kawasan spektrum yang kelihatan atau ultraviolet. Di samping itu, mereka biasanya hadir dalam campuran dengan sebatian lain yang juga menghasilkan tindak balas kimia yang serupa. Kedua-dua masalah boleh diatasi dengan enzim yang sesuai untuk penukaran terpilih ditentukan metabolit dalam bahan berwarna, yang lebih lanjut oleh keamatan penyerapan cahaya.

(. Lihat Diabetes Mellitus) Kaedah biasa untuk menentukan glukosa darah adalah berdasarkan kepada dua tindak balas berturut-turut: 1) pembentukan gluconolactone dan hidrogen peroksida H2O2 oleh oxidase glukosa enzim, 2) pengoksidaan bahan berwarna hidrogen peroksida di dalam kawasan berwarna hijau dalam satu tindak balas dimangkinkan oleh peroxidase. Apabila semua glukosa yang ada dalam sampel digunakan, jumlah bahan-bahan berwarna terbentuk boleh ditentukan oleh penyerapan cahaya, yang adalah berkadar terus dengan kandungan glukosa asal.

Seksyen artikel "Analisis enzim":

  • Analisis enzimatik
  • A. Asas spektrofotometri
  • B. Penentuan aktiviti dehidrogenase laktat
  • B. Penentuan enzim glukosa

Struktur:

Senarai:

Kerumitan bahan:

Saiz dan unit:

Buku rujukan dalam bentuk visual - dalam bentuk skema warna - menerangkan semua proses biokimia. Sebatian kimia biokimia penting, struktur dan sifat mereka, proses utama dengan penyertaan mereka, serta mekanisme dan biokimia proses yang paling penting dalam alam dipertimbangkan. Bagi pelajar dan guru universiti kimia, biologi dan perubatan, biokimia, ahli biologi, pakar perubatan, serta semua yang berminat dalam proses kehidupan.

Laman ini bukan medium massa. Penonton - 16+.

Vitamin: - sifat vitamin, hipovitaminosis, vitamin A, - vitamin D, - vitamin K, - vitamin E, - vitamin f, - vitamin B1, - vitamin B2, - vitamin B3, - vitamin b5, - vitamin b6, - Vitamin B9, - Vitamin B12, - Vitamin H, - Vitamin C, - Vitamin R.

Glukosa darah (diagnosis makmal)

PENGENALAN

Glukosa adalah penunjuk utama metabolisme karbohidrat.

Sumber utama karbohidrat dalam tubuh adalah makanan. Karbohidrat makanan terutamanya polisakarida (kanji dan selulosa), disakarida (sukrosa dan laktosa), monosakarida (glukosa dan fruktosa), dan beberapa gula lain. Penghadaman separa kanji dan glikogen bermula di rongga mulut di bawah tindakan amilase salivary. Dalam usus kecil di bawah pengaruh amilase pankreas, pembelahan terakhir polisakarida ini kepada maltosa, yang terdiri daripada dua molekul glukosa, berlaku. Jus usus mengandungi sejumlah besar hidrolase - enzim yang memecahkan disaccharides (maltosa, sukrosa dan laktosa) kepada monosakarida (glukosa, fruktosa dan galaktosa). Yang terakhir, terutamanya glukosa dan galaktosa, secara aktif diserap oleh mikrovilli usus kecil, masukkan aliran darah dan sampai ke hati melalui sistem vena portal.

Jumlah glukosa dapat ditentukan baik secara keseluruhan dalam darah dan plasma, dan dalam serum darah disebabkan pengedaran seragam antara plasma dan unsur-unsur yang terbentuk.

Tahap glukosa darah biasa:
• darah tali pusat - 2.5-5.3 mmol / l;
• pramatang - 1.1-3.33 mmol / l;
• bayi baru lahir 1 hari - 2.22-3.33 mmol / l;
• 1 bulan - 2.7-4.44 mmol / l;
• kanak-kanak berumur 5-6 tahun - 3.33-5.55 mmol / l;
• Orang dewasa sehingga 60 tahun - 4.44-6.38 mmol / l;
• Lebih 60 tahun - 4.61-6.1 mmol / l.

pada orang dewasa:
• hipoglikemia - kandungan glukosa di bawah 3.3 mmol / l
• hiperglisemia - kandungan glukosa lebih daripada 6.1 mmol / l

. gangguan metabolisma karbohidrat boleh berlaku di mana-mana tahap metabolisme gula: mencerna mereka dalam saluran gastrointestinal, penyerapan dalam usus kecil, metabolisme sel karbohidrat dalam hati dan organ lain

Peningkatan glukosa (hyperglycemia):
• kencing manis pada orang dewasa dan kanak-kanak;
• hiperglikemia fisiologi (senaman sederhana, emosi kuat, tekanan, merokok, tergesa-gesa adrenalin semasa suntikan);
• Patologi endokrin (pheochromocytoma, thyrotoxicosis, acromegaly, gigantism, sindrom Cushing, somatostatinoma);
• penyakit pankreas (pankreatitis akut dan kronik, pankreatitis dalam kes parotitis wabak, fibrosis kistik, hemochromatosis, tumor pankreas);
• penyakit hati dan buah pinggang kronik;
• pendarahan di otak, infarksi miokardium;
• kehadiran antibodi kepada reseptor insulin;
• mengambil thiazides, kafein, estrogen, glucocorticoid.

Mengurangkan glukosa (hypoglycemia):
• penyakit pankreas (hiperplasia, adenoma atau karsinoma, sel beta dari pulau kecil Langerhans - insulinoma, kekurangan sel alfa di pulau - kekurangan glukagon);
• Patologi endokrin (penyakit Addison, sindrom adrenogenital, hypopituitarisme, hypothyroidism);
• pada masa kanak-kanak (bayi pramatang yang dilahirkan untuk ibu-ibu dengan diabetes mellitus, hypoglycemia ketotik);
• overdosis ubat hipoglikemik dan insulin;
• penyakit hati yang teruk (sirosis, hepatitis, karsinoma, hemochromatosis);
• Tumor tidak pankreas ganas: kanser adrenal, kanser perut, fibrosarcoma;
• fermentopati (glikogenoses - penyakit Girke, galaksiemia, toleransi fruktosa terjejas);
• gangguan fungsi - hypoglycemia reaktif (gastroenterostomy, postgastroectomy, gangguan autonomi, pelanggaran motilitas gastrointestinal);
• gangguan makan (berpuasa berpanjangan, sindrom malabsorpsi);
• keracunan dengan arsenik, kloroform, salisilat, antihistamin, mabuk alkohol;
• usaha keras fizikal, keadaan demam;
• mengambil steroid anabolik, propranolol, amphetamine.

Terdapat keadaan perantaraan antara diabetes dan diabetes mellitus: toleransi glukosa terjejas (paras gula darah puasa berada di bawah angka "kencing manis" 6.1 mmol / l, dan 2 jam selepas beban glukosa dari 7.8 hingga 11.1 mmol / l). Diagnosis seperti itu mencerminkan kemungkinan menghidap kencing manis di masa depan (nama tidak rasmi adalah pra-diabetes).

Memperkenalkan konsep yang lain: glukosa berpuasa glukosa - paras gula darah berpuasa dari 5.5 hingga 6.1 mmol / l, dan 2 jam selepas beban glukosa dalam julat normal - sehingga 7.8 mmol / l - yang juga dianggap sebagai faktor risiko perkembangan lanjut kencing manis.


. Keadaan puasa adalah ketiadaan pengambilan makanan sekurang-kurangnya 8 jam

PENETAPAN TAHAP GLUCOSE DARAH

Petunjuk untuk analisis:
• diabetes mellitus yang bergantung kepada insulin dan diagnosis dan pemantauan penyakit;
• patologi kelenjar tiroid, kelenjar adrenal, hipofisis;
• penyakit hati;
• penentuan toleransi glukosa pada orang yang berisiko menghidap kencing manis;
• obesiti;
• kencing manis wanita hamil;
• Toleransi glukosa terjejas.

Penyediaan untuk kajian: pada perut kosong, tidak kurang dari 8 jam selepas makan terakhir. Adalah dinasihatkan untuk mengambil darah pada waktu pagi. Ia adalah perlu untuk mengecualikan peningkatan tekanan psiko-emosi dan fizikal. Glukosa dalam sampel darah yang diambil terus dimakan oleh sel-sel darah (erythrocytes, leukosit - terutamanya dengan jumlah leukosit yang tinggi). Oleh itu, perlu memisahkan plasma (serum) dari sel-sel selambat-lambatnya 2 jam selepas pensampelan, atau menggunakan tiub ujian dengan inhibitor glikolisis. Sekiranya syarat-syarat ini tidak dipenuhi, hasil yang kurang jelas dapat diperhatikan.

Tiga kumpulan kaedah digunakan untuk menentukan glukosa darah:
• enzim, yang mana kaedah glukosa oksidase adalah yang paling biasa;
• Kaedah pengurangan berdasarkan keupayaan glukosa untuk mengurangkan garam tembaga atau nitrobenzena;
• kaedah berdasarkan tindak balas warna dengan produk yang dibentuk oleh pemanasan karbohidrat dengan toluidin.


. kaedah glukosa oksidase - satu kaedah untuk menentukan kandungan glukosa dalam darah dan air kencing, berdasarkan tindak balas pengoksidaannya dengan kehadiran enzim glukosa oksidase dengan pembentukan hidrogen peroksida, yang seterusnya dengan kehadiran peroksidase mengoksidakan orthotolidine untuk membentuk produk berwarna; pengiraan kepekatan glukosa darah dilakukan secara fotometrik, membandingkan intensiti warna dengan graf penentukuran


Dalam amalan klinikal, glukosa ditentukan oleh:
• dalam darah kapilari yang diambil dari jari, kaedah ini paling biasa kerana sejumlah kecil darah (biasanya tidak lebih daripada 0.1 ml) diperlukan untuk menjalankan kajian, dan juga kerana fakta bahawa kaedah ini menyedari dirinya dalam kemungkinan penentuan bebas (rumah) glikemia menggunakan glucometer;
• dalam darah vena (bahan kajian adalah darah diambil dari vena) menggunakan penganalisis automatik;


. meter glukosa darah - sistem pemantauan glukosa darah individu untuk kegunaan rumah oleh pesakit kencing manis; Sampel darah untuk ujian diambil dengan bantuan alat automatik khas yang membolehkan kulit jari ditusuk dengan lancet steril; setetes darah digunakan pada jalur ujian, sebelum dimasukkan ke dalam pemegang meter, selepas jangka waktu tertentu (kira-kira 45 saat), peranti itu memberikan satu siri bip dan memaparkan hasil penentuan glukosa darah pada skrin


"Keadaan yang sangat membingungkan dengan terminologi muncul semasa penafsiran penyelidikan makmal yang paling sering dilakukan - penentuan glukosa dalam darah. Alasannya adalah bahawa peranti yang berbeza menentukan dan merekod jumlah glukosa yang berbeza. Ini terutama disebut apabila menentukan tahap glukosa dengan meter glukosa darah individu. Hasil ujian sampel darah tunggal dengan meter glukosa darah dari pengeluar yang berbeza mungkin berbeza dan, paradoks, setiap hasil yang diperoleh mungkin betul. Sebab paradoks ini adalah bahawa sesetengah glucometers menentukan dan "menunjukkan" nilai mutlak glukosa dalam darah keseluruhan, sementara yang lain mengira semula nilai ini kepada kepekatan glukosa dalam plasma darah. Perbezaannya mencapai purata 12%. Keadaan yang sama berlaku apabila mereka mula membandingkan nilai glukosa yang diperolehi pada glucometer dan pada penganalisis biokimia yang bergerak, yang menentukan tahap glukosa dalam plasma. Jika arahan kepada meter menunjukkan bahawa peranti menentukan tahap glukosa dalam plasma darah, maka hasil kajian sampel yang sama tidak boleh berbeza dengan lebih daripada 20%. Jika meter "menunjukkan" tahap glukosa dalam darah keseluruhan, maka untuk perbandingan, nilai ini mesti didarabkan dengan faktor 1.11. Untuk mengelakkan kekeliruan dalam penafsiran keputusan seperti ujian penting dan membuat keputusan yang salah tentang keadaan pesakit, hasil kajian harus menunjukkan di mana bahan kajian itu dilakukan (plasma atau darah utuh). Bahan rujukan menunjukkan nilai rujukan kepekatan glukosa plasma. Apabila menjalankan kelas dengan pelajar sekolah diabetik, perhatikan prinsip operasi meter glukosa darah individu dan sifat hasil yang dipaparkan. Apabila membandingkan hasil penyelidikan yang diperolehi di makmal pegun dengan meter glukosa darah individu, perlu mengambil kira jenis glukosa darah. Ia perlu menyatukan persembahan hasil ujian glukosa dalam darah keseluruhan dalam unit yang bersamaan dengan kepekatannya dalam plasma "(Ketua Laboratorium Biokimia Klinikal, ESC, RAMS Ilyin AV).

DETECTION OF HIDDEN (BORANG SUBKLINIKAL) BAKAR KECUKURAN KARBOHIDIR

Untuk mengenal pasti gangguan (subklinikal) gangguan metabolisme karbohidrat digunakan:
• Ujian toleransi glukosa intravena;
• Ujian toleransi glukosa lisan.


. jika tahap glukosa dalam plasma darah vena pada perut kosong melebihi 15 mmol / l (atau beberapa kali pada perut kosong melebihi tahap 7.8 mmol / l), ujian toleransi glukosa tidak diperlukan untuk membuat diagnosis diabetes mellitus

Ujian toleransi glukosa intravena

Ujian toleransi glukosa intravena menghapuskan faktor yang berkaitan dengan kekurangan pencernaan dan penyerapan karbohidrat dalam usus kecil, yang mempengaruhi tahap glukosa darah apabila diberikan secara lisan. Selama tiga hari sebelum kajian, pesakit menerima diet yang mengandungi kira-kira 150 gram karbohidrat setiap hari. Penyelidikan dijalankan pada perut kosong. Pada kadar 0.5 g / kg berat badan, glukosa ditadbir secara intravena dalam bentuk penyelesaian 25% dalam masa 1-2 minit. Kepekatan glukosa dalam plasma darah ditentukan lapan kali - pada perut kosong dan selepas 3, 5, 10, 20, 30, 45 dan 60 minit selepas pemberian intravena glukosa. Kadang-kadang pada masa yang sama menentukan insulin plasma. Kirakan pekali asimilasi glukosa (K), mencerminkan kadar kehilangan glukosa dari darah selepas pentadbiran intravena. Untuk melakukan ini, tentukan masa (T1 / 2) yang diperlukan untuk mengurangkan separuh kandungan glukosa, ditentukan 10 minit selepas penyerapan.

Koefisien asimilasi glukosa dikira dengan formula:

K = 70 / T 1/2

di mana T1 / 2 - bilangan minit yang diperlukan untuk mengurangkan sebanyak 2 kali tahap glukosa dalam darah, ditentukan 10 minit selepas infusi.

Biasanya, beberapa minit selepas permulaan pentadbiran glukosa, tahap dalam darah boleh mencapai nilai tinggi (sehingga 13.88 mmol / l). Kepekatan insulin puncak juga diperhatikan semasa 5 minit pertama. Kandungan glukosa kembali ke nilai asal kira-kira 90 minit selepas permulaan kajian. Setelah 2 jam, kepekatan glukosa lebih rendah daripada yang awal, dan selepas 3 jam, ia akan kembali ke tahap awal (bersandar).

Koefisien asimilasi glukosa (K):
• pada orang dewasa tanpa gangguan metabolisme karbohidrat lebih daripada 1.3;
• dalam pesakit kencing manis, nilai K berada di bawah 1.3 (biasanya sekitar 1.0 dan ke bawah), dan puncak kepekatan insulin dikesan selepas 5 minit dari permulaan kajian.

Ujian toleransi glukosa oral

Ujian toleransi glukosa oral telah menjadi lebih meluas. Selama tiga hari, pesakit menerima diet yang mengandungi kira-kira 150 gram karbohidrat setiap hari (menurut beberapa data, pesakit perlu mengikuti diet dan senaman yang biasa). Penyelidikan dijalankan pada perut kosong. Ia tidak boleh didahului oleh situasi yang tertekan. Semasa kajian itu dilarang penggunaan makanan dan merokok. 75 g glukosa dimasukkan ke dalam segelas teh panas (300 ml air). Kandungan glukosa dalam darah kapilari ditentukan empat kali - pada perut kosong dan 60, 90 dan 120 minit selepas pemberian glukosa.

Biasanya, tahap glukosa serum mencapai maksimum 60 minit selepas pentadbiran glukosa dan hampir kembali kepada yang awal selepas 120 minit. Kepekatan glukosa di atas profil ini biasanya ditafsirkan sebagai ujian toleransi glukosa diabetes, yang dengan kebarangkalian tahap tinggi menunjukkan kehadiran diabetes pada pesakit.

Sekiranya dalam keseluruhan darah kapilari diambil pada perut kosong, kandungan gula melebihi 6.7 mmol / l, dan 2 jam selepas beban, ia melebihi 11.1 mmol / l, maka ini mengesahkan bahawa pesakit mempunyai diabetes.

Pelanggaran toleransi glukosa ditunjukkan jika kandungan gula dalam darah puasa berada di bawah 6.7 mmol / l, dan gula darah yang diambil selepas 2 jam adalah antara 7.8 mmol / l dan 11.1 mmol / l.

Ujian toleransi glukosa negatif (tidak mengesahkan diagnosis diabetes) dianggap jika gula dalam darah diambil pada perut kosong di bawah 6.7 mmol / l, dan gula dalam darah yang diambil selepas 2 jam ialah 7.8 mmol / l.

Apabila mentafsir ujian toleran glukosa, perhatian harus dibayar kepada ciri berkaitan usia. Adalah diterima bahawa pada orang yang berumur lebih dari 50 tahun, ujian toleransi glukosa pada jam 1 dan 2 meningkat dengan purata 0.5 mmol / l setiap 10 tahun berikutnya. Untuk menyesuaikan ujian toleransi glukosa pada orang yang berusia lebih dari 50 tahun, untuk setiap 10 tahun, tambahkan 0.5 (mmol / l) kepada nombor glisemik pada jam 1 dan 2.

Toleransi glukosa terjejas di samping diabetes mellitus sering dijumpai di acromegaly, penyakit Cushing, thyrotoxicosis, kegagalan buah pinggang, dan sirosis hati. Kehamilan boleh disertai dengan sedikit penurunan toleransi karbohidrat (lebih kerap, paras gula darah meningkat 2 jam selepas beban glukosa).

KECEPATAN HYPER- dan HYPOGLYCEMIC

Maklumat tambahan mengenai keadaan metabolisma karbohidrat boleh didapati dengan mengira dua petunjuk ujian toleransi glukosa:
• faktor hyperglycemic - nisbah glukosa dalam 60 minit ke tahap pada perut kosong;
• pekali hypoglycemic - nisbah glukosa darah dalam 120 minit selepas beban ke tahap pada perut kosong.


OK:
• faktor hyperglycemic tidak lebih daripada 1.7
• pekali hypoglycemic kurang daripada 1.3

lebihan nilai normal sekurang-kurangnya satu indikator ini
bukti toleransi glukosa menurun

HOLOGLOBIN GLYCOLICATED

Hemoglobin Glycolated (glycated) (HbA1c) adalah hemoglobin yang telah memasuki reaksi kimia bukan enzimatik dengan glukosa atau monosakarida lain dalam darah yang beredar.

Akibat tindak balas ini, residu monosakarida dilekatkan pada molekul protein (Hb). Jumlah hemoglobin glikasi terbentuk bergantung kepada kepekatan glukosa dalam darah dan pada tempoh interaksi hemoglobin dengan larutan yang mengandung glukosa. Oleh itu, kandungan Hb glikosilat mencirikan tahap purata kepekatan glukosa dalam darah dalam tempoh masa yang relatif lama sepadan dengan molekul hemoglobin seumur hidup (kira-kira 3-4 bulan).

Petunjuk untuk analisis:
• diagnosis dan pemeriksaan diabetes;
• Pemantauan jangka panjang kursus dan kawalan ke atas rawatan pesakit diabetes mellitus;
• menentukan tahap pampasan untuk diabetes;
• Tambahan kepada ujian toleransi glukosa dalam diagnosis prediabetes, diabetes intensiti rendah;
• pemeriksaan kehamilan (diabetes laten).


. menurut cadangan WHO (2002), penentuan hemoglobin glikasi dalam darah pesakit diabetes perlu dilakukan 1 kali setiap satu suku


Bersedia untuk kajian ini. Tahap hemoglobin bergelombang tidak bergantung pada masa siang, tenaga, pengambilan makanan, ubat-ubatan yang ditetapkan, dan keadaan emosi pesakit. Keadaan yang menyebabkan pemendakan purata "usia" eritrosit (selepas kehilangan darah akut, dengan anemia hemolitik) boleh memalsukan secara kurang keputusan ujian.

Untuk menentukan glycated Hb, kromatografi, electrophoretic dan kaedah kimia digunakan, berdasarkan penilaian keamatan reaksi residu Hb monosakarida glikosilat dengan substrat yang dipilih secara khusus (contohnya, dengan asid thiobarbituric). Hasil kajian dinyatakan dalam peratusan molar, yaitu, dalam jumlah residu monosakarida per 100 molekul hemoglobin.


OK:
Kandungan glikosilikat Hb,
dengan reaksi dengan asid thiobarbituric,
adalah 4.5-6.1 peratus molar.


Tafsiran hasilnya. Tafsiran hasil terhalang oleh perbezaan teknologi makmal dan perbezaan individu pesakit - penyebaran nilai HbA1c dalam dua orang dengan gula darah purata yang sama boleh mencapai 1%.

Meningkatkan nilai:
• kencing manis dan keadaan lain dengan toleransi glukosa terjejas;
• penentuan tahap pampasan:
5.5 - 8% - kencing manis yang baik
8 - 10% - kencing manis yang agak baik
10 - 12% - diimbangi sebahagiannya
> 12% - kencing manis yang tidak dikompensasi
• kekurangan zat besi;
• splenectomy;
• Peningkatan palsu boleh disebabkan oleh kepekatan hemoglobin janin (HbF) yang tinggi.

Nilai yang lebih rendah:
hipoglikemia;
• anemia hemolitik;
• pendarahan;
• pemindahan darah.

Kaedah untuk penentuan glukosa darah

Penunjuk utama metabolisme karbohidrat adalah glukosa. Mengukur gula darah membantu dalam mengenal pasti pelbagai penyakit, khususnya diabetes mellitus dan pelbagai jenis penyakit darah. Untuk mengelakkan banyak masalah, doktor mengesyorkan untuk mengekalkan tahap glukosa dalam julat normal.

Kaedah

Ada beberapa kaedah yang dapat dengan cepat mengukur paras gula darah. Yang paling popular ialah:

  • Enzimatik;
  • Kaedah Hexokinase.
Reduktif dan kolorimetrik juga digunakan sebelum ini, tetapi disebabkan ketoksikan dan ketepatan yang rendah, mereka tidak lagi digunakan dalam perubatan moden.

Kaedah enzimatik untuk penentuan glukosa darah secara konvensional dibahagikan kepada:

Kaedah glukosa oksidase

Penentuan glukosa darah dengan kaedah glukosa oksidase telah digunakan sejak awal abad ini.
Ia popular kerana ia menggunakan enzim untuk mendapatkan hasil. Iaitu, berdasarkan tindak balas pengoksidaan glukosa dalam darah atau air kencing. Dan juga hasilnya dengan penggunaan plasma darah. Kesederhanaan kaedah ini juga terletak pada fakta bahawa hasilnya dapat diperoleh dengan sangat cepat dengan fotometer biokimia, serta dengan penganalisis automatik.
Pakar menganggap kaedah ini menjadi yang paling tepat, dan darah atau serum diperlukan untuk dianalisis.
Ia juga mempunyai beberapa kelemahan: semasa analisis, hidrogen peroksida, yang terbentuk daripada sintesis, dapat mengurangkan kesan glukosa.

Oleh itu, kaedah ini dianggap linear, dengan ralat 30 mmol / l.

Kaedah Hexokinase

Kaedah ini dianggap sebagai rujukan untuk mengukur tahap glukosa dalam darah, tetapi yang paling tepat kerana ia tidak berinteraksi dengan komponen serum darah. Selalunya kaedah ini digunakan dalam jabatan endokrinologi.
Kakitangan makmal boleh mencadangkan cara untuk menjalankan analisis sedemikian:

  • untuk menjalankan tinjauan menggunakan penganalisis biokimia automatik;
  • Fotometer automatik, yang digunakan dalam makmal kecil;
  • dalam keadaan kecemasan, meter glukosa darah pegang tangan (One Touch) akan menjadi mudah.

Cepat, anda boleh menentukan tahap glukosa dalam darah setiap orang.

Bagaimana untuk menganalisis penentuan glukosa?

Anda boleh melakukan ujian darah di makmal atau di rumah. Hampir semua kaedah ujian makmal melibatkan pensampelan darah dari urat atau jari. Dan walaupun analisis ini tidak memerlukan latihan khas. Terdapat faktor yang boleh menjejaskan keputusan:

Anna Ponyaeva. Lulus dari Akademi Perubatan Nizhny Novgorod (2007-2014) dan Residensi dalam Diagnostik Makmal Klinikal (2014-2016). Tanya soalan >>

  • Aktiviti fizikal yang kuat pada malam sebelum analisis.
  • Kejutan emosi yang kuat.
  • Makan berlebihan atau minum berlebihan.
  • Ia juga perlu diingat bahawa anda tidak boleh menggunakan ubat sebelum ujian darah selama 2-3 hari.
Jika darah diambil untuk analisis dari urat, ini perlu dilakukan pada waktu pagi, dengan perut kosong.

Sekiranya analisis menggunakan darah dari jari, ia boleh diambil pada bila-bila masa.
Kualiti ujian makmal boleh dipengaruhi oleh faktor-faktor berikut:

  • masa pengumpulan darah;
  • bahan tiub atau sistem kualiti pengumpulan darah;
  • kedudukan badan pesakit;
  • kelayakan perubatan.

Penyimpanan dan pengangkutan sampel sangat penting untuk keputusan yang betul. Untuk tujuan ini, sistem penyimpanan vakum khas digunakan, yang boleh melindungi sampel dari faktor luaran.

Bekas tersebut melindungi dari matahari dan cahaya, sampel darah boleh disimpan di dalamnya sehingga 2 hari.

Meter mudah alih

Glucometers fotometrik, sebagai penganalisis glukosa, boleh menggunakan hanya darah kapilari untuk analisis. Ini bermakna analisis boleh dilakukan di rumah menggunakan darah dari jari atau tumit.

Tonton video mengenai topik ini.

Glucometers fotometrik yang paling popular

Peranti ini menunjukkan hasilnya, yang berdasarkan perubahan dalam warna darah, yang merupakan tindak balas glukosa dan bahan-bahan yang digunakan pada jalur ujian.

Glucometers elektrokimia

Glucometers jenis ini adalah yang paling mudah dan berkualiti tinggi. Glucometer elektrokimia menunjukkan tahap gula oleh arus elektrik, yang muncul akibat interaksi darah dengan glukosa.

Ini adalah peranti yang paling tepat.

Glucometers spektrometri

Peranti ini tidak melibatkan sentuhan dengan darah.

Logam glukosa darah spektrum mengimbas sawit manusia dengan laser dan membaca proses biokimia khas.

Meter lain:

  1. meter glukosa darah laser
  2. sentuh,
  3. meter dengan kawalan suara,
  4. Glucometer Romanovsky, yang hanya membawa kepada kulit manusia.

Bagaimana untuk menjalankan ujian?

Agar peranti menghasilkan hasil yang stabil dan tepat berikut:

  • Simpan peranti dalam keadaan yang baik, tanpa perubahan suhu yang kuat dan kelembapan yang tinggi.
  • Jalur adonan hendaklah disimpan dalam bekas pelindung.

Sebelum ujian, anda perlu:

  • Basuh tangan dengan teliti dan bersihkan tapak tusuk dengan lap alkohol.
  • Selepas menusuk kulit perlu dirawat dengan antiseptik.
  • Lebih baik mengambil darah untuk ujian di bilik mandi.
  • Jarum mesti disterilkan.
  • Kedalaman dan tempat tusuk perlu menentukan doktor yang hadir.

Darah pada jalur perlahan-lahan bersandar terhadap meter, dengan teliti ikuti arahan, bergantung pada jenis peranti.
Ia adalah perlu untuk menjalankan pensampelan darah tidak lebih daripada 4 kali sehari.

Norma analisis

Kadar biasa untuk orang berusia 14 hingga 60 tahun adalah dari 3 hingga 5 mmol / l.

  • Untuk bayi baru lahir sehingga 1 bulan - dari 2.8 hingga 4 mmol / l.
  • Kanak-kanak di bawah umur 14 tahun - 3.5-5.5.
  • Dari 14 hingga 60 - 3-5,5.
  • Dari 60 hingga 90 tahun - 4.5 - 6.5 mmol / l.
  • Lebih 90 tahun - sehingga 6.7 mmol / l.
Bagi wanita dan lelaki, kadarnya adalah sama.

Pada wanita, ia boleh meningkat hanya dalam tempoh kehamilan. Pada wanita hamil, kadar adalah 5 hingga 6.5 mmol / l.
Nilai yang semakin meningkat:

  • diabetes;
  • kekurangan zat besi;
  • Peningkatan mungkin disebabkan oleh hemoglobin janin.

Nilai dikurangkan:

  • anemia;
  • pendarahan;
  • hipoglikemia;
  • pemindahan darah selanjutnya.

Langkah-langkah pencegahan

Dengan perubahan kecil dalam kadar glukosa, anda perlu menetapkan diet sedini mungkin. Bagi pesakit yang mempunyai hiperglikemia, anda mesti menghapuskan penggunaan karbohidrat.
Bagi mereka yang menghidap diabetes dan ingin mengekalkan paras glukosa mereka normal, anda perlu menggunakan nombor 9 diet.

Sekiranya paras glukosa dilupuskan kerana penyakit lain yang mungkin, mereka harus dihapuskan dengan serta-merta.
Dalam setiap kes, anda harus berjumpa doktor dan ikut cadangan.

Jika terdapat keperluan untuk pengukuran tahap glukosa yang kerap, anda perlu berhati-hati tentang cara memilih meter darah yang betul.

Hampir semua peranti mempunyai sijil kualiti, dan hasilnya tepat seperti di makmal. Mengikuti arahan doktor dan ahli farmasi, anda boleh memantau tahap glukosa di rumah, tanpa lawatan harian ke hospital. Menjaga tahap gula normal adalah sangat penting, kerana kenaikan atau penurunan boleh mempengaruhi kerja seluruh organisma dan mencetuskan pelbagai penyakit. Selain itu, orang yang menghidap diabetes, anda perlu melawat doktor lebih kerap untuk diperiksa.

Glukosa

Karbohidrat yang paling biasa di dalam badan haiwan adalah glukosa. Ia memainkan peranan hubungan antara tenaga dan fungsi plastik karbohidrat, kerana semua monosakarida lain boleh dibentuk daripada glukosa, dan sebaliknya - pelbagai monosakarida dapat berubah menjadi glukosa.

Lebih daripada 90% daripada semua karbohidrat darah berat molekul rendah yang terlarut adalah glukosa; Di samping itu, fruktosa, maltosa, mannose dan pentosa mungkin terdapat dalam jumlah yang kecil, dan dalam kes patologi, galaktosa. Bersama mereka dalam darah mengandungi polisakarida yang berkaitan dengan protein.

Glukosa secara intensif digunakan dan digunakan untuk pelbagai keperluan tisu sistem saraf pusat, erythrocytes, medulla buah pinggang. Dalam metabolisme pertengahan, glukosa digunakan untuk membentuk glikogen, gliserol dan asid lemak, asid amino, asid glucuronic dan glikoprotein. Kepekatan glukosa dalam darah adalah turunan dari proses glikolisis dan pengoksidaan asid trikarboksilat dalam kitaran TCA, glikogenesis dan glikogenolisis dalam tisu hati dan otot, glukoneogenesis dalam hati dan buah pinggang, dan pengambilan glukosa dari usus.

Dalam amalan klinikal, glukosa darah biasanya diperiksa, kepekatan gula dan glikogen lain digunakan kurang kerap. Dalam darah manusia, glukosa diagihkan secara merata antara plasma dan unsur-unsur membentuk, kandungan gula dalam darah vena adalah 0.25-1.0 mmol / l (purata 10%) kurang daripada darah arteri dan kapilari. Takrifan asid laktik dan piruvat, aktiviti enzim metabolisme karbohidrat, asid sialik dan heksuronik, seromukoid, hemoglobin glikosilat, dan petunjuk lain adalah nilai diagnostik yang diketahui.

Kandungan glukosa dalam air kencing bergantung kepada kepekatannya dalam darah, walaupun diekskripsikan kedua-duanya pada tahap normal dan pada tahap gula darah tinggi. Dengan peningkatan kepekatan glukosa darah, ambang ginjal yang dipanggil (di kalangan orang yang sihat terletak di kawasan 8.3-9.9 mmol / l) dan glukosuria berlaku. Dengan buah pinggang arteriosklerotik, dengan kencing manis, peningkatan ambang dan glukosuria tidak dapat diperhatikan walaupun dengan peningkatan kepekatan glukosa hingga 11.0-12.1 mmol / l.

Kaedah untuk penentuan glukosa darah dibahagikan kepada tiga kumpulan: pengurangan, kolimetrik dan enzim.

1. Kaedah pengurangan:

  • Kaedah titrometrik Hagedorn-Jensen berdasarkan harta gula untuk memulihkan, apabila mendidih dalam garam kalium, besi-dan-sinodik dan garam kalium sinergi. Menurut tahap pemulihan ini, kepekatan gula dalam darah diperiksa oleh titrometri. Kelebihan penting kaedah ini ialah kos yang rendah dan kemungkinan penggunaan di mana-mana makmal;
  • berdasarkan pengurangan nitrobenzenes, sebagai contoh, asid picric kepada asid picramic;
  • kaedah berdasarkan keupayaan glukosa untuk memulihkan garam tembaga. Tembaga monovalen bertindak sebagai perantaraan. Dioksidakan oleh oksigen di udara, ia menghasilkan semula asid arsenik-molybdic atau phosphorotungstic, yang berfungsi sebagai kromogen akhir.

Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa kaedah kumpulan ini memberikan hasil yang terlalu besar (kira-kira 20-25%), kerana darah mengandungi sebilangan sebatian yang tidak berkaitan dengan karbohidrat, tetapi telah mengurangkan sifat (asid urik, glutation, kreatinin, asid askorbik) ;

2. Kaedah colorimetric. Ini termasuk:

  • Kaedah Somodzhi - tindak balas pengurangan tembaga, yang berada dalam komposisi reagen tembaga-ortron, kepada cuprous oksida. Kaedah ini susah payah, multi-dipentaskan, tidak spesifik dan hampir tidak digunakan pada masa kini;
  • Kaedah Folina-Wu - pengurangan tembaga tartrate kepada litium oksida. Kaedah ini mudah, kelemahan adalah kekurangan ketetapan yang ketat antara intensiti warna yang diperoleh dan kepekatan glukosa;
  • Penentuan kepekatan glukosa menurut Morris dan Roe - dehidrasi glukosa di bawah tindakan asid sulfurik dan penukarannya ke dalam oxymethylfurfural, yang menggabungkan dengan arthron ke dalam sebatian biru. Memerlukan reagen tulen dan pematuhan ketat terhadap suhu tindak balas berterusan;
  • Kaedah orthotoluidine Gultman dalam pengubahsuaian Khivarinen-Nikkil, yang terdiri daripada penentuan intensiti penapisan penyelesaian, yang berlaku apabila amina orthotoluidine berinteraksi dengan kumpulan aldehid glukosa dalam medium berasid. Kaedah ini adalah tepat dan membolehkan penentuan glukosa yang lebih spesifik.
  • Kaedah aniline, mengekalkan kepekaan kaedah orthotoluidine, tetapi lebih spesifik.

3. Kaedah enzimatik:

  • berdasarkan reaksi heksokinase. Glukosa di bawah tindakan hexokinase di fosforilasi oleh ATP, Gl-6-F yang terhasil di hadapan dehydrogenase mengembalikan NADP. Jumlah yang ditentukan ditentukan oleh peningkatan penyerapan cahaya di rantau ultraviolet. Kaedah ini terlalu mahal untuk makmal praktikal.
  • berdasarkan pengoksidaan glukosa kepada asid glucuronic menggunakan enzim glukosa oksidase dan pembentukan semasa tindak balas hidrogen peroksida, yang (dalam versi berbeza):

1. Kaedah penentuan enzim glukosa dalam serum

Prinsip: glukosa di hadapan enzim glukosa oksidase dioksidakan oleh oksigen atmosfera dengan pembentukan hidrogen peroksida, pemusnahan yang di bawah pengaruh peroksidase mengakibatkan pemeluwapan fenol dan p-aminoantipyrine menjadi sebatian berwarna. Keamatan pewarnaan dalam kes ini adalah berkadar dengan kepekatan glukosa.

.Reagen, bahan yang disiasat. 1. Reagen kerja. 2. Larutan glukosa standard. 3. Ujian serum Kepekatan glukosa dikira dengan formula: Con = (Eon * Cst) / Est (1 adalah kepekatan glukosa dalam ujian, ketumpatan 2-optik ujian, 3 kepekatan glukosa dalam sampel standard, 4 - kepadatan optik sampel standard )

Kepekatan normal glukosa darah ialah 3.65-6.11 mmol / l.

Peningkatan glukosa darah di atas 6.11 mmol / l dipanggil hyperglycemia. Terdapat dua kumpulan hyperglycemia: 1. Insular - yang berkaitan dengan kandungan yang tidak mencukupi dalam badan insulin atau kerana tidak berkesan tindakannya (diabetes). 2. Extrastrainsular - bebas daripada kesan insulin: - peningkatan fungsi hormon kelenjar tiroid (hyperthyroidism), kelenjar adrenal (pheochromocytoma), hipofisis. - Kerosakan hati meresap. - kerosakan mekanikal dan toksik kepada sistem saraf pusat. - kecederaan dan tumor otak. - epilepsi. - tekanan emosi yang kuat.

Proses-proses berikut adalah paling penting dalam pembentukan hyperglycemia extrenaular: - pecahan glikogen yang dipertingkatkan. - peningkatan glukogenesis. - Penghambatan sintesis glikogen. - Pengurangan penggunaan glukosa di bawah pengaruh hormon - antagonis insulin.

Adalah dipercayai bahawa keadaan ini berlaku apabila tahap glukosa dalam darah keseluruhan kurang dari 2.2 mmol / l, dan apabila ditentukan oleh kaedah enzimatik dalam serum - kurang daripada 2.5 mmol / l.

Gejala hipoglikemia mungkin disebabkan oleh rembesan berlebihan adrenalin dan disfungsi CNS. Hipoglisemia adalah berbahaya kerana glukosa merupakan sumber tenaga penting untuk otak. Penyebab hipoglikemia oleh mekanisme pembangunan boleh dibahagikan kepada tiga kumpulan: 1. Mengurangkan output glukosa. 2. Peningkatan penggunaan glukosa. 3. Mengurangkan hasil dan peningkatan penggunaan glukosa.

2. Penentuan jumlah protein dalam serum darah dengan kaedah biuret

Prinsip kaedah: Kaedah kuantitatif berdasarkan tindak balas biuret: dalam medium alkali, ion tembaga membentuk sebatian ungu kompleks dengan protein. Keamatan warna penyelesaian adalah berkadar dengan kepekatan protein, yang diukur secara fotometrik.

Reagen, bahan yang dikaji:

Reagen biuret (reagen kerja).

2. Larutan protein standard.

3. Serum.

Kepekatan jumlah protein dikira dengan rumus: Con = (EOn * Cct) / Eats (1 adalah kepekatan jumlah protein dalam ujian, 2 adalah ketumpatan optik ujian, 3 adalah kepekatan jumlah protein dalam sampel standard, 4 adalah ketumpatan optik sampel standard)

Kepekatan normal jumlah protein darah pada orang dewasa adalah 65-85g L, pada kanak-kanak 56-85g L

Nilai diagnostik: Plasma darah manusia mengandungi lebih daripada 100 jenis protein. Albumin, imunoglobulin, lipoprotein, fibrinogen, transferrin membentuk kira-kira 90% daripada jumlah protein. Protein lain terdapat dalam plasma dalam kuantiti yang lebih kecil.

Menurunkan kepekatan jumlah protein dalam darah dipanggil hipoproteinemia, masing-masing, peningkatan - hypoproteinemia.

Penyebab hipoproteinemia adalah:

1. faktor pencegahan (iaitu pengambilan protein yang tidak mencukupi dari makanan): puasa, kekurangan zat makanan, berkaitan dengan pelbagai jenis makanan, dan penyakit seperti stenosis esofagus, stenosis pilorik perut.

2. Kekurangan pencernaan protein akibat pelbagai penyakit gastrousus, misalnya: enteritis kronik;

3. pelanggaran biosintesis protein; hepatitis, sirosis, mabuk yang teruk, gangguan kongenital sintesis protein individu - analbuminemia, penyakit Wilson - Konovalov.

4. Kehilangan protein dalam darah (perdarahan akut dan kronik) dan air kencing (sindrom nefrotik).

5. Pemindahan protein ke tisu lain adalah pembentukan longkang, peralihan ke ruang ketiga yang dipanggil (exudates dalam rongga serous, dalam lumen usus, di permukaan terbakar.

6. meningkatkan kerosakan protein dalam badan; tumor, fungsi tiroid meningkat, selalu berlaku dengan halangan usus.

7. Penurunan fisiologi dalam kepekatan protein, misalnya, pada bulan-bulan terakhir kehamilan dan semasa penyusuan.

Penurunan relatif dalam kepekatan protein total boleh dilihat dengan peningkatan jumlah cecair yang beredar: suntikan besar cecair secara intravena, jatuh, atau penurunan tajam diuretik; hiperproduksi hormon antidiuretik hypothalamus, dekompensasi jantung.

Hyperproteinemia jarang berlaku. Hyperproteinemia mutlak (iaitu tidak berkaitan dengan ketidakseimbangan air) diperhatikan dalam pelbagai myeloma, polyarthritis kronik, proses keradangan yang tahan lama. Relatif (iaitu, disebabkan oleh penurunan jumlah cecair yang beredar) - dengan luka bakar teruk, peretonit, muntah dan cirit-birit yang menderita, diabetes insipidus, halangan usus, kegagalan buah pinggang kronik, peningkatan peluh.

Perlu diingat bahawa dalam sesetengah penyakit, khususnya, halangan usus, peritonitis yang meresap, hiperproteinemia relatif yang dijumpai dalam analisis biokimia topeng darah, ciri defisit protein patologi ini.

Hipoproteinemia hampir selalu dikaitkan dengan hipoalbuminemia, dan hiperproteinemia hampir selalu dikaitkan dengan hiperglikulemia.

Kaedah oksidase glukosa dan hexokinase untuk menentukan glukosa serum dalam darah

Diagnosis tepat, rawatan preskripsi memerlukan satu siri ujian makmal.

Kaedah menentukan glukosa serum adalah alat yang paling penting dalam mengesan hyper- dan hypoglycemia pada pesakit diabetes mellitus.

Kaedah ini membolehkan penyesuaian gangguan metabolik data terapi perubatan. Tahap glukosa diagnostik juga boleh ditentukan di seluruh darah dan plasmanya.

Kaedah untuk penentuan glukosa darah

Kaedah untuk menentukan jumlah glukosa dalam darah berkembang banyak.

Sebahagian daripada mereka (penguranganometrik, kolorimetri) tidak dapat digunakan kerana ketoksikan yang tinggi dan ketepatan yang rendah hasilnya.

Kajian enzim yang paling sering digunakan. Kaedah glukosa oksidase adalah kaedah reaksi warna yang berlaku apabila karbohidrat dipanaskan. Hexokinase menentukan aktiviti darah pada hexokinase.

Kaedah glukosa oksidase

Kaedah glukosa oksidase untuk menentukan glukosa darah adalah berdasarkan tindak balas pengoksidaan di bawah pengaruh enzim. Ini membentuk hidrogen peroksida, ia menyerap bahan Chromogen, kepekatan yang menentukan jumlah glukosa.

Kaedah glukosa oksidase digunakan untuk:

  • intoleransi fruktosa keturunan;
  • pentozurii;
  • intoleransi laktulosa.

Kelemahan kajian ini ialah hidrogen peroksida mampu mengoksida kromogen dan askorbat, asid urik dan bilirubin yang ada dalam darah. Kirakan jumlah kaedah fotometrik glukosa, intensiti pewarnaan dibandingkan dengan graf penentukuran.

Di bawah keadaan makmal, tahap bahan boleh ditentukan:

  1. dalam darah vena. Penganalisis automatik digunakan;
  2. dalam darah kapilari. Pagar dijalankan dari jari.

Kaedah elektrokimia adalah menggunakan elektrod yang mengandungi oksidase glukosa. Jumlah hidrogen peroksida yang dihasilkan, atau tahap oksigen yang masih digunakan semasa proses pengoksidaan, ditentukan.

Kaedah Hexokinase

Bahan ini adalah enzim yang paling penting dalam metabolisme glukosa, yang menghadkan kelajuan proses dalam sel.

Di bawah keadaan makmal, di bawah tindakan hexokinase, glukosa di fosforilasi oleh adenosine trifosfat.

Hasil daripada tindak balas, molekul organik terbentuk, jumlahnya ditentukan oleh tahap penyerapan cahaya dalam zon ultraviolet. Reaksi heksokinase positif yang cepat juga boleh menjadi tanda berlakunya tumor malignan.

Penyediaan untuk analisis

Ujian glukosa serum darah ditetapkan untuk:

Sebelum analisis, adalah perlu untuk mematuhi beberapa syarat supaya keputusannya dapat dipercaya sebanyak mungkin:

  1. penyelidikan dijalankan pada perut kosong. Bahan yang diambil pada waktu pagi;
  2. beberapa hari sebelum diagnosis, adalah perlu untuk mengelakkan penuaan fizikal berat, tekanan;
  3. Dalam diet harian pesakit mesti sekurang-kurangnya 150 gram karbohidrat. Dengan kekurangan, tahap glukosa akan bertambah, dan ia jatuh secara perlahan, yang mengganggu data analisis;
  4. hari sebelum diagnosis tidak boleh merokok dan minum alkohol;
  5. Anda tidak boleh menjalankan kajian selepas operasi berat, bersalin, di hadapan keradangan. Contraindicated dalam analisis sirosis hati, pembesaran penyakit perut, proses tumor;
  6. beberapa hari sebelum kajian, prosedur fisioterapeutik tidak boleh diambil, pil kontraseptif, ubat diuretik, ubat psikotropik, kafein perlu diambil.

Analisis ini dapat memberi kesan positif palsu pada hipokalemia dan penyakit endokrin (Cushing syndrome, thyrotoxicosis).

Darah serum glukosa mengikut umur

Penunjuk biasa bergantung kepada umur:

  • darah kord mungkin mengandungi 2.5 hingga 5.3 mmol / l;
  • pada bayi pramatang - dari 1.1 hingga 3 mmol / l;
  • kanak-kanak hari pertama kehidupan - dari 2.22 hingga 3.33;
  • pada umur 2.7 hingga 4.4;
  • pada kanak-kanak berumur 6 tahun ke atas - dari 3.3 hingga 5.5 mmol / l;
  • pada orang dewasa sehingga 60 tahun - dari 4.4 hingga 6.3;
  • pada orang tua - dari 4.6 hingga 6.1 mmol / l.

Hipoglisemia pada orang dewasa didiagnosis dengan nilai glukosa kurang daripada 3.3 mmol / l, dan hiperglikemia - lebih daripada 6.1 mmol / l.

Apakah indikator peningkatan atau pengurangan?

Hyperglycemia (kenaikan glukosa darah) diperhatikan apabila:

  • Pelanggaran fungsi hormon kelenjar pituitari, kelenjar tiroid: thyrotoxicosis, acromegaly, sindrom Cushing;
  • penyakit pankreas: kencing manis, pankreatitis, fibrosis sista, kejadian neoplastik, hemochromatosis;
  • penyakit hati, buah pinggang;
  • gangguan sistem saraf: pendarahan, tumor, kecederaan otak;
  • keracunan dengan ether, asid hydrocyanic;
  • dengan meningitis, epilepsi;
  • penyakit jantung: infarksi miokardium, angina pectoris;
  • kekurangan vitamin B 1;
  • luka bakar teruk.

Hipoglisemia berlaku pada pesakit dengan:

  • tumor pulau pankreas, kekurangan glukagon;
  • kerosakan hati yang disebabkan oleh keracunan arsenik, minuman beralkohol, tablet antihistamin, fosforus, sebatian merkuri, benzena, paracetamol;
  • penyakit hati apabila pembentukan glikogen dan glukoneogenesis terjejas;
  • gangguan endokrin: penyakit addison, hypothyroidism;
  • penyakit buah pinggang, usus yang disebabkan oleh penyerapan terjejas.

Video berkaitan

Mengenai penentuan glukosa serum dalam darah dalam video:

Menentukan tahap glukosa diperlukan untuk diagnosis dan pembetulan rawatan yang tepat untuk diabetes. Kaedah analisis heksokinase melibatkan penentuan aktiviti hexokinase dalam serum. Kaedah oksidase glukosa menentukan jumlah bahan dalam cecair plasma, cerebrospinal.

Analisis dilakukan pada perut kosong. Pada malam sebelum kajian ini tidak dapat melibatkan diri dalam buruh fizikal yang kuat, minum alkohol dan asap. Kaedah ini adalah dalam mengkaji reaksi pengoksidaan glukosa dengan penyertaan enzim glukosa oksidase, di mana hidrogen peroksida terbentuk.

Selalunya, kaedah ini digunakan di jabatan endokrinologi hospital. Penyiasatan dijalankan menggunakan penganalisis automatik, fotometer. Dalam keadaan kecemasan, gunakan meter glukosa darah mudah alih.

  • Menstabilkan tahap gula dalam tempoh yang lama
  • Memulihkan pengeluaran insulin oleh pankreas

Prinsip dan kimia kaedah enzimatik untuk penentuan glukosa dalam darah

A. Kaedah enzimatik untuk penentuan kuantitatif glukosa dalam serum atau plasma
Penentuan kuantitatif glukosa dalam darah adalah salah satu kaedah utama untuk diagnosis gangguan metabolisme karbohidrat.
Nilai klinikal dan diagnostik

Peningkatan kepekatan glukosa serum (hyperglycemia) paling kerap diperhatikan dengan rembesan insulin yang tidak mencukupi, dan juga dengan hiperfungsi kelenjar tiroid dan hypersecretion hormon, khususnya, dengan tumor korteks adrenal dan tumor hipofisis.

Hypoglycemia boleh berlaku dengan hipofungsi kelenjar tiroid, cachexia pituitari, penyakit Addison, adenoma pankreas, dan juga boleh disebabkan oleh berpuasa, kerja fizikal yang berpanjangan, atau berlebihan insulin.
Tujuan kerja

Tentukan kandungan glukosa dalam serum ujian dengan kaedah enzimatik dan bandingkan hasil yang diperolehi dengan nilai normal.
Prinsip kaedah ini

Glukosa dioksidakan oleh oksigen atmosfera dengan adanya enzim yang sangat spesifik, glukosa oksidase, dengan pembentukan hidrogen peroksida. Kemudian hidrogen peroksida di hadapan enzim peroksidase bereaksi dengan 4-aminoantipyrine dan fenol. Akibatnya, sebatian berwarna terbentuk, ketumpatan optik yang pada 510 nm berkadaran dengan kepekatan glukosa dalam sampel dianalisis.
Prestasi kerja (lihat lampiran)

( = 510 nm, ketebalan cuvette 0.5 cm). D510

* 4-aminoantipirin, p-hydroxybenzenesulfonate, peroksidase dan glukosa oksidase, penampan fosfat (pH 8.0)
Pengiraan glukosa dalam serum (mol / l):

Norm: untuk serum dan plasma darah 3.9 - 6.1 mmol / l, untuk keseluruhan darah 3.3-5.5 mmol / l.
Kesimpulan

B. Penentuan glukosa darah menggunakan glucometer (demonstrasi)
Prinsip penentuan glukosa enzimatik adalah asas banyak meter glukosa darah automatik, yang boleh didapati digabungkan dengan jalur ujian elektrokimia yang digunakan.

Penentuan kepekatan glukosa dalam darah dilakukan selepas memohon sampel darah pada jalur yang disambungkan ke peranti. Peranti mengesan sampel darah, menentukan kepekatan glukosa dan memaparkan bacaan pada skrin. Peranti ini boleh digunakan dalam amalan klinikal sekiranya tidak dapat diterokai kaedah pengukuran makmal, dalam kajian saringan, dalam keadaan medan dan situasi kecemasan, serta bagi kegunaan individu untuk memantau tahap glukosa secara kekal dalam darah pesakit diabetes.
B. Ujian toleransi glukosa lisan (sinonim: ujian toleransi glukosa, reaksi badan kepada beban gula)
Dalam orang yang sihat, dos tunggal 50-100 g glukosa menyebabkan peningkatan sementara kandungannya dalam hiperglikemia darah atau pencernaan. Hiperglikemia ini disebabkan oleh fakta bahawa apabila sejumlah besar glukosa datang dengan serta-merta, hati tidak mempunyai masa untuk sepenuhnya menggunakannya, dan sebahagian daripada glukosa memasuki darah. Peningkatan glukosa dalam darah menyebabkan pembebasan insulin, yang menormalkan paras darahnya selepas 1.5-2 jam. Biasanya, jumlah insulin yang berlebihan dilepaskan, dan tahap glukosa turun sedikit di bawah normal. Dengan kekurangan insulin, kandungan glukosa dalam darah selepas beban mencapai nilai yang lebih tinggi dan bertahan lebih lama.
Tujuan kerja

Berhubung dengan metodologi ujian, membina "kurva gula" pada data yang dicadangkan dan menganalisisnya secara bebas.
Prestasi kerja

Sebelum ini, pesakit dewasa menentukan kandungan glukosa darah puasa. Kemudian dia mengambil dalam 75 g glukosa dibubarkan dalam 250-300 ml air. Setelah 30, 60, 90, 120 dan 150 minit selepas mengambil glukosa, kandungannya dalam darah ditentukan, dan hasilnya digambarkan sebagai lengkung, di mana masa pengumpulan darah dalam minit diperincikan pada abscissa, dan jumlah glukosa yang dinyatakan dalam mmol diplotkan pada ordinat. / l. Grafik sedemikian secara tradisional dipanggil "lengkung gula":

Berdasarkan data di bawah (lihat jadual), dicadangkan untuk membina "kurva gula", membandingkannya dengan satu sama lain dan membuat kesimpulan tentang status insulin pesakit (A, B dan C).

Mengikut kriteria Pertubuhan Kesihatan Sedunia (WHO), kepekatan glukosa adalah 7.8 - 10.0 mmol. l -1 dalam darah penuh kapilari 2 jam selepas pengambilan glukosa menunjukkan toleransi glukosa terjejas, dan di atas 11.1 mmol. l -1 - tentang diabetes.

Berdasarkan rykovodstvo.ru

Kaedah glukosa oksidase digunakan untuk menentukan kepekatan glukosa secara eksklusif dalam pelbagai cecair badan. Kelebihan ujian ini adalah ketepatannya. Diagnostik, berbeza dengan kaedah cepat, membolehkan untuk mendedahkan jumlah glukosa tulen, tanpa sebarang fruktosa dan gula lain. Prinsip tindak balas ini adalah untuk mewarnai penyelesaian, yang berlaku akibat interaksi agen pengoksidaan dengan pewarna khusus. Penilaian hasil penyelidikan dijalankan dengan menggunakan kaedah colorimetry dan perbandingan dengan penyelesaian standard.

Ujian ini digunakan untuk mengesan toleransi gula terjejas dan perkembangan prediabetes, serta pada ketinggian penyakit ini. Tetapi bagi tujuan sedemikian, analisis jarang digunakan, ini disebabkan oleh kos yang tinggi dan menunggu lama hasilnya. Selalunya, penentuan glukosa dalam darah dan air kencing menggunakan kaedah ini digunakan dalam diagnosis pembezaan penyakit seperti:

  • sindrom intoleransi laktosa;
  • intoleransi fruktosa;
  • pembebasan fruktosa dengan cecair badan;
  • Peningkatan kepekatan pentosis dalam air kencing.

Kelebihan ujian glukosa oksidase yang tidak diragukan adalah ketepatannya.

Terdapat pelbagai cara untuk menentukan kepekatan glukosa dalam darah, tetapi glukosa oksidase adalah yang paling tepat. Dasarnya adalah bahawa interaksi gula dengan oksigen di udara mengoksidasi reagen. Hidrogen peroksida dilepaskan ke dalam larutan. Bahan ini berinteraksi dengan orthotoluidine, membentuk sebatian berwarna. Untuk tindak balas tindak balas ini memerlukan kehadiran enzim khas. Glukosa oksidase mesti hadir dalam tindak balas pengoksidaan, dan peroksidase dalam pewarnaan cecair. Keamatan warna penyelesaian bergantung pada kandungan glukosa dan paling sengit dengan kandungannya yang tinggi.

Penilaian keputusan berlaku menggunakan kaedah kuantumatif fotometri melalui tempoh masa yang sama. Pastikan anda menggunakan penyelesaian penentukuran yang mengandungi kadar gula tertentu dan, bermula dari itu, anda boleh menilai kepekatan glukosa dalam cecair badan, selalunya dalam darah.

Bahan diambil dari pesakit pada perut kosong. Untuk ujian menggunakan darah vena dalam jumlah 5 ml. Pada malam sebelum diagnosis pesakit ditunjukkan diet yang ketat. Ini akan membolehkan untuk menghakimi kebolehpercayaan keputusan dan mengecualikan kemungkinan kesalahan dalam analisis. 2 hari sebelum penarikan darah, pesakit mesti melepaskan tabiat buruk minum dan merokok. Ia juga perlu untuk mengehadkan pengambilan hidangan terlalu manis dan, jika boleh, elakkan situasi yang tertekan.

Selalunya, kaedah penentuan kepekatan glukosa ini dilakukan dengan kaedah sentrifugasi, yang digunakan untuk memisahkan elemen berbentuk. Jumlah gula ditentukan dalam plasma. Apabila semua reagen yang diperlukan ditambah, warna itu diperhatikan selepas 20 minit jika ujian dijalankan pada suhu bilik. Pengiraan tahap glukosa dijalankan mengikut jadual penentukuran atau menggunakan peraturan bahagian.

Untuk menentukan gula adalah paling mudah untuk menggunakan kaedah pesat untuk penentuan glukosa dalam darah. Ini disebabkan oleh penggunaan dan hasil yang cepat. Di samping itu, pesakit tidak perlu pergi ke makmal atau hospital. Tetapi tidak seperti ujian oksidase glukosa, diagnosis seperti ini tidak boleh dipercayai. Oleh kerana ia tidak membezakan glukosa daripada gula lain dan menentukan kepekatan mereka bersama-sama.

Asas tindak balas oksidase glukosa ialah penyelesaian 9% natrium klorida dan zink sulfat 50%. Mereka ditambah pada peringkat sentrifugasi darah. Di samping itu, gunakan larutan penampan dengan asid asetik dan natrium asetat. Kaedah titrasi untuk menentukan pHnya pada 4.8. Selepas itu, oksidase glukosa ditambah, yang menyebabkan hidrogen peroksida dan peroksidase, yang terlibat dalam pewarnaan penyelesaian kepada kepekatan yang dikehendaki untuk mendapatkan hasil yang tepat.

Jumlah gula diukur dalam unit khas - milimol per liter larutan.

Ujian darah glukosa oksidase mesti dilakukan pada perut kosong dan plasma atau serum digunakan untuk ini. Kadar bilangan orang dewasa untuk wanita dan lelaki adalah 3.3-5.5. Bagi kanak-kanak di bawah umur 15 tahun, angka ini sedikit lebih rendah dan antara 3.2 hingga 5.3. Dalam bayi baru lahir, glukosa darah adalah 1.7-4.2. Peningkatan prestasi diperhatikan dengan perkembangan pesakit diabetes mellitus atau melanggar toleransi glukosa. Keadaan ini adalah prediabetes, dan jika ia tidak dirawat tepat pada waktunya, maka tidak lama lagi ia akan membawa kepada perkembangan patologi yang teruk ini.

Berdasarkan etodiabet.ru

Penentuan glukosa darah adalah langkah penting untuk mendiagnosa diabetes. Untuk melakukan ini, perlu menentukan keadaan metabolisme karbohidrat, dan pertama sekali, kandungan glukosa dalam darah. Biasanya, kepekatannya terletak dalam 3, 3-5, 5 mmol / l. Terdapat sejumlah besar kaedah penentuan, yang membolehkan untuk membentuk glukosa darah.

Antaranya ialah kaedah penentuan kaedah reduktometrichesky, colorimetrik, enzimatik:

Kaedah penentuan reduktometrik. Berdasarkan keupayaan gula, khususnya glukosa, untuk mengurangkan garam logam berat dalam medium alkali. Terdapat pelbagai reaksi. Salah satunya adalah untuk memulihkan garam darah merah ke garam darah kuning dengan gula dalam keadaan persekitaran mendidih dan alkali. Selepas tindak balas khusus ini, kandungan gula ditentukan oleh titrasi. Tetapi kaedah ini tidak menemui aplikasi yang luas di klinik kerana kerumitan dan kekurangan ketepatannya;

Kaedah penentuan kolum warna. Glukosa dapat bertindak balas dengan pelbagai sebatian, mengakibatkan pembentukan bahan-bahan baru warna tertentu (apa yang dipanggil "tindak balas warna"). Mengikut tahap warna penyelesaian menggunakan alat khas (photocolorimeter) menilai kepekatan glukosa dalam darah. Satu contoh tindak balas sedemikian ialah kaedah Samoji. Ia didasarkan pada tindak balas pengurangan glukosa oksida tembaga hidrat, menghasilkan pembentukan molibdenum azure.

Kaedah enzim untuk menentukan kepekatan glukosa dalam darah adalah yang paling biasa. Terdapat dua jenis utama kaedah ini: glukosa oksidase dan hexokinase. Pada masa ini, kaedah pengesanan glukosa oksidase adalah yang paling biasa. Mereka didasarkan pada penggunaan enzim glukosa oksidase. Enzim ini bertindak balas dengan glukosa, akibatnya hidrogen peroksida terbentuk. Jumlah hidrogen peroksida yang terbentuk adalah sama dengan jumlah glukosa dalam sampel asal.

Kaedah penentuan Hexokinase juga sangat spesifik dan tepat, oleh itu, telah menemui aplikasi luas dalam amalan klinikal.

57. Glikolisis aerobik. Urutan reaksi terhadap pembentukan piruvat (glikolisis aerobik). Kepentingan fisiologi glikolisis aerobik. Penggunaan glukosa untuk sintesis lemak.

Katabolisme glukosa merupakan pembekal utama tenaga untuk proses-proses penting tubuh.

A. Cara utama katabolisme glukosa

Pengoksidaan glukosa kepada CO2 dan H2Mengenai (kerosakan aerobik). Kerosakan glukosa aerobik boleh dinyatakan dengan persamaan ringkasan:

Proses ini merangkumi beberapa peringkat (Rajah 7-33).

Glikolisis aerobik - proses pengoksidaan glukosa dengan pembentukan dua molekul piruvat;

Laluan umum katabolisme, termasuk penukaran pyruvate kepada asetil-CoA dan pengoksidaan selanjutnya dalam kitaran sitrat;

CPE untuk oksigen yang konjugat dengan tindak balas dehidrogenasi yang berlaku dalam proses penguraian glukosa.

Glikolisis aerob adalah proses pengoksidaan glukosa kepada asid piruvat, yang berlaku di hadapan oksigen. Semua enzim yang memangkinkan tindak balas proses ini dilokalkan dalam sitosol sel.

Berdasarkan studfiles.net

Karbohidrat yang paling biasa di dalam badan haiwan adalah glukosa. Ia memainkan peranan hubungan antara tenaga dan fungsi plastik karbohidrat, kerana semua monosakarida lain boleh dibentuk daripada glukosa, dan sebaliknya - pelbagai monosakarida dapat berubah menjadi glukosa.

Lebih daripada 90% daripada semua karbohidrat darah berat molekul rendah yang terlarut adalah glukosa; Di samping itu, fruktosa, maltosa, mannose dan pentosa mungkin terdapat dalam jumlah yang kecil, dan dalam kes patologi, galaktosa. Bersama mereka dalam darah mengandungi polisakarida yang berkaitan dengan protein.

Glukosa secara intensif digunakan dan digunakan untuk pelbagai keperluan tisu sistem saraf pusat, erythrocytes, medulla buah pinggang. Dalam metabolisme pertengahan, glukosa digunakan untuk membentuk glikogen, gliserol dan asid lemak, asid amino, asid glucuronic dan glikoprotein. Kepekatan glukosa dalam darah adalah turunan dari proses glikolisis dan pengoksidaan asid trikarboksilat dalam kitaran TCA, glikogenesis dan glikogenolisis dalam tisu hati dan otot, glukoneogenesis dalam hati dan buah pinggang, dan pengambilan glukosa dari usus.

Dalam amalan klinikal, glukosa darah biasanya diperiksa, kepekatan gula dan glikogen lain digunakan kurang kerap. Dalam darah manusia, glukosa diagihkan secara merata antara plasma dan unsur-unsur membentuk, kandungan gula dalam darah vena adalah 0.25-1.0 mmol / l (purata 10%) kurang daripada darah arteri dan kapilari. Takrifan asid laktik dan piruvat, aktiviti enzim metabolisme karbohidrat, asid sialik dan heksuronik, seromukoid, hemoglobin glikosilat, dan petunjuk lain adalah nilai diagnostik yang diketahui.

Kandungan glukosa dalam air kencing bergantung kepada kepekatannya dalam darah, walaupun diekskripsikan kedua-duanya pada tahap normal dan pada tahap gula darah tinggi. Dengan peningkatan kepekatan glukosa darah, ambang ginjal yang dipanggil (di kalangan orang yang sihat terletak di kawasan 8.3-9.9 mmol / l) dan glukosuria berlaku. Dengan buah pinggang arteriosklerotik, dengan kencing manis, peningkatan ambang dan glukosuria tidak dapat diperhatikan walaupun dengan peningkatan kepekatan glukosa hingga 11.0-12.1 mmol / l.

Kaedah untuk penentuan glukosa darah dibahagikan kepada tiga kumpulan: pengurangan, kolimetrik dan enzim.

1. Kaedah pengurangan:

  • Kaedah titrometrik Hagedorn-Jensen berdasarkan harta gula untuk memulihkan, apabila mendidih dalam garam kalium, besi-dan-sinodik dan garam kalium sinergi. Menurut tahap pemulihan ini, kepekatan gula dalam darah diperiksa oleh titrometri. Kelebihan penting kaedah ini ialah kos yang rendah dan kemungkinan penggunaan di mana-mana makmal;
  • berdasarkan pengurangan nitrobenzenes, sebagai contoh, asid picric kepada asid picramic;
  • kaedah berdasarkan keupayaan glukosa untuk memulihkan garam tembaga. Tembaga monovalen bertindak sebagai perantaraan. Dioksidakan oleh oksigen di udara, ia menghasilkan semula asid arsenik-molybdic atau phosphorotungstic, yang berfungsi sebagai kromogen akhir.

Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa kaedah kumpulan ini memberikan hasil yang terlalu besar (kira-kira 20-25%), kerana darah mengandungi sebilangan sebatian yang tidak berkaitan dengan karbohidrat, tetapi telah mengurangkan sifat (asid urik, glutation, kreatinin, asid askorbik) ;

2. Kaedah colorimetric. Ini termasuk:

  • Kaedah Somodzhi - tindak balas pengurangan tembaga, yang berada dalam komposisi reagen tembaga-ortron, kepada cuprous oksida. Kaedah ini susah payah, multi-dipentaskan, tidak spesifik dan hampir tidak digunakan pada masa kini;
  • Kaedah Folina-Wu - pengurangan tembaga tartrate kepada litium oksida. Kaedah ini mudah, kelemahan adalah kekurangan ketetapan yang ketat antara intensiti warna yang diperoleh dan kepekatan glukosa;
  • Penentuan kepekatan glukosa menurut Morris dan Roe - dehidrasi glukosa di bawah tindakan asid sulfurik dan penukarannya ke dalam oxymethylfurfural, yang menggabungkan dengan arthron ke dalam sebatian biru. Memerlukan reagen tulen dan pematuhan ketat terhadap suhu tindak balas berterusan;
  • Kaedah orthotoluidine Gultman dalam pengubahsuaian Khivarinen-Nikkil, yang terdiri daripada penentuan intensiti penapisan penyelesaian, yang berlaku apabila amina orthotoluidine berinteraksi dengan kumpulan aldehid glukosa dalam medium berasid. Kaedah ini adalah tepat dan membolehkan penentuan glukosa yang lebih spesifik.
  • Kaedah aniline, mengekalkan kepekaan kaedah orthotoluidine, tetapi lebih spesifik.
  • berdasarkan reaksi heksokinase. Glukosa di bawah tindakan hexokinase di fosforilasi oleh ATP, Gl-6-F yang terhasil di hadapan dehydrogenase mengembalikan NADP. Jumlah yang ditentukan ditentukan oleh peningkatan penyerapan cahaya di rantau ultraviolet. Kaedah ini terlalu mahal untuk makmal praktikal.
  • berdasarkan pengoksidaan glukosa kepada asid glucuronic menggunakan enzim glukosa oksidase dan pembentukan semasa tindak balas hidrogen peroksida, yang (dalam versi berbeza):